Metodología de pesquisa primaria de actividad antidengue a partir de productos naturales / Methodology for primary screening of antidengue activity based on natural products

Introducción: El virus dengue, transmitido por mosquitos del género Aedes ha reemergido en los últimos años produciendo la enfermedad transmitida por artrópodos con mayor prevalencia en humanos, y no existe una terapia antiviral específica ni vacunas, para su tratamiento y prevención. Ello ha motivado la búsqueda de productos y compuestos naturales con actividad antiviral, lo cual trae consigo la necesidad de establecer un sistema de evaluación de productos naturales y sintéticos mediante una metodología de pesquisa rápida in vitro. Objetivo: Proponer un sistema de pesquisa primaria de actividad antiviral contra el virus dengue basado en células. Métodos: Se utilizaron como fuentes primarias de información trabajos publicados en revistas nacionales e internacionales registradas en las bases de datos SciELO o PubMed. Los ejemplos seleccionados en las figuras y tabla proceden de las publicaciones conjuntas del Grupo de Virología de la Facultad de Biología de la Universidad de La Habana y del Laboratorio de Arbovirus del Instituto de Medicina Tropical Pedro Kourí. Información, análisis y síntesis: Se presentan las principales metodologías basadas en células, y se enfatiza en aquellas asumidas por nuestro grupo (evaluación de la citotoxicidad y el ensayo primario de actividad antiviral). Se muestra el algoritmo de evaluación de un producto. La metodología descrita ha permitido poner en marcha un programa de búsqueda de fármacos antidengue, teniendo en cuenta los criterios de la evaluación de la eficacia antiviral y la toxicidad, para realizar un estudio posterior de mecanismo de acción de los diferentes compuestos o productos evaluados.

Introduction: Dengue virus, transmitted by Aedes specie mosquitos, has re-emerged in the last years causing the arthropod-borne disease with higher prevalence in humans, to which there is no specific antiviral therapy or vaccine for its treatment and prevention. This has motivated the search for natural-based products with antiviral activity, which implies the need to establish an evaluation system of natural and synthetic products through a rapid in vitro screening methodology. Objective: To propose a primary screening cell-based antiviral activity system against dengue virus. Methods: Papers published in national and international journals indexed in SciELO or PubMed were used as primary sources of information. The examples selected in the figures and table were retrieved from the joint publications of the Virology Group of the School of Biology of the University of Havana and the Arbovirus Laboratory of the Institute of Tropical Medicine Pedro Kourí. Information, Analysis and Synthesis: The main cell-based methodologies are presented, with emphasis on those assumed by our research group (evaluation of cytotoxicity and the primary antiviral activity assay). The algorithm for product evaluation is presented. The methodology described has allowed initiating a search program for antidengue drugs, taking into account the criteria for evaluating antiviral efficacy and toxicity, in order to carry out a subsequent study on the mechanisms of action of the different compounds or products evaluated.

Actividad citotóxica y antiproliferativa in vitro del extracto acuoso de Phyllanthus comosus

RESUMEN Introducción: Desde los inicios de la medicina antigua, las plantas han sido utilizadas como tratamiento en diversas enfermedades incluyendo las de naturaleza infecto-contagiosa y el cáncer. Son numerosos los informes sobre las propiedades biológicas del género Phyllanthus. Objetivo: Evaluar la actividad citotóxica y antiproliferativa de un extracto acuoso de Phyllanthus comosus en tres líneas celulares, dos de origen tumoral (SiHa y HeLa) y una no tumoral (Vero). Métodos: La actividad citotóxica se evaluó mediante el método del MTT y la capacidad antiproliferativa mediante el ensayo de detección de inhibición de colonias o clonogénico. Se tuvieron en cuenta valores como la concentración citotóxica media (CC50), índice selectivo y porcentaje de disminución de la proliferación celular. Resultados: En el ensayo de citotoxicidad se obtuvieron CC50 similares para ambas líneas tumorales; mientras que el valor para la línea Vero resultó tres veces menos tóxico, con valores de índice de selectividad mayor que tres. El ensayo clonogénico demostró inhibición de la proliferación en las líneas tumorales, mientras que en células Vero no se observó inhibición de la capacidad de formación de colonias. Conclusiones: El extracto de P. comosus es más citotóxico para las líneas tumorales SiHa y HeLa que para las células Vero, no tumorales. Además, la inhibición de la formación de clonos celulares en ambas líneas tumorales evidencia su acción antiproliferativa y selectiva, lo que argumenta su potencialidad antitumoral in vitro

ABSTRACT Introduction: Ever since the onset of ancient medical practice, plants have been used to treat a variety of conditions, including infectious communicable diseases and cancer. A large number of reports are available about the biological properties of the genus Phyllantus. Objective: Evaluate the cytotoxic and antiproliferative activity of an aqueous extract of Phyllanthus comosus on three cell lines: two of tumoral origin (SiHa and HeLa) and one of non-tumoral origin (Vero). Methods: Cytotoxic activity was evaluated by the MTT method, and antiproliferative capacity by colony inhibition detection or clonogenic assay. Mean cytotoxic concentration (CC50), selective index and cell proliferation reduction percentage were some of the values taken into account. Results: The cytotoxicity assay obtained similar CC50 values for both tumor cell lines, whereas the value for the Vero line was three times less toxic, with a selectivity index above three. The clonogenic assay revealed proliferation inhibition in the tumor cell lines, whereas no inhibition of colony forming capacity was observed in Vero cells. Conclusions: The P. comosus extract is more cytotoxic for tumoral cell lines SiHa and HeLa than for non-tumor Vero cells. Additionally, inhibition of the formation of cell clones in both tumor cell lines is evidence of its antiproliferative and selective action, substantiating its in vitro antitumor potential.

Evaluación preliminar de la actividad antiviral de Ageratina havanensis frente al virus dengue-2 utilizando ensayos inmunoenzimáticos

RESUMEN Introducción: Se presenta la evaluación preliminar de la actividad antiviral de extractos de Ageratina havanensis (etanólico de tallo, AH-T-EtOH; butanólico de hoja, AH-H-ButOH y acetato de etilo de hoja, AH-H-AcEtO) utilizando dos sistemas inmunoenzimáticos, un ELISA celular (ELISAc) y la técnica de inmunoperoxidasa. Objetivo: Evaluar la actividad antiviral de los extractos de Ageratina havanensis utilizando dos sistemas inmunoenzimáticos. Métodos: Se normalizó y empleó un ELISAc y la técnica de inmunoperoxidasa en evaluar de forma preliminar la actividad antiviral de tres extractos de Ageratina havanensis a diferentes concentraciones y tiempos de adición mediante la detección de la expresión de la proteína E del virus dengue. Resultados: El ELISAc logró como parámetros óptimos: línea celular Vero, antígeno viral en cultivo de células, tiempo de expresión de la proteína E de 96 h, compuesto fijador metanol-acetona y bloqueador leche descremada al 1 %. La menor expresión de la proteína E (mayor inhibición sobre la replicación viral), fue al adicionar el extracto AH-T-EtOH a su mayor concentración y 1 h antes de inocular el virus dengue-2 cepa A15 (VDEN-2 A15). El extracto AH-H-ButOH a concentraciones de 125 µg/mL y 250 µg/mL presentó una ligera limitación de expresión de E 1 h después de la inoculación viral. El extracto AH-H-AcEtO a las concentraciones empleadas, no mostró difererencia añadido antes y después de la inoculación. El ensayo de inmunoperoxidasa exhibió resultados análogos para los extractos. Conclusiones: La mayor inhibición de la replicación viral fue obtenida con el extracto AH-H-ButOH, a su mayor concentración y ambos tiempos de adición. Los ensayos inmunoenzimáticos aplicados son herramientas útiles para evaluar extractos de Ageratina havanensis con posible actividad antiviral.

ABSTRACT Introduction: A preliminary evaluation is presented of the antiviral activity of Ageratina havanensis extracts (stem ethanolic, AH-T-EtOH; leaf butanolic, AH-H-ButOH; and leaf ethyl acetate, AH-H-AcEtO) using two enzyme immunoassays, cellular ELISA (C-ELISA) and immunoperoxidase technique. Objective: Evaluate the antiviral activity of Ageratine havanensis extracts using two enzyme immunoassays. Methods: C-ELISA and immunoperoxidase technique were standardized for use in the preliminary evaluation of the antiviral activity of three Ageratina havanensis extracts at different concentrations and addition times through detection of the expression of the E protein of dengue virus. Results: C-ELISA achieved the following optimal parameters: Vero cell line, viral antigen in cell culture, protein E expression time 96 h, methanol-acetone fixation compound and 1% skimmed milk blocker. The smallest expression of protein E (greatest inhibition over viral replication) was achieved at addition of extract AH-T-EtOH at its highest concentration and 1 h before inoculating dengue-2 virus strain A15 (VDEN-2 A15). Extract AH-H-ButOH at concentrations of 125 µg/ml and 250 µg/ml presented a slight limitation in the expression of E 1 h after viral inoculation. Extract AH-H-AcEtO at the concentrations used did not show any difference when added before and after inoculation. The immunoperoxidase assay exhibited similar results for the extracts. Conclusions: The greatest inhibition of viral replication was obtained with extract AH-H-ButOH at its highest concentration and at both addition times. The enzyme immunoassays applied are useful tools to evaluate Ageratine havanensis extracts with potential antiviral activity.

Evaluación preliminar de la actividad de Ageratina havanensis contra virus dengue 2 / Preliminary evaluation of the activity of Ageratina havanensis against the dengue 2 virus

. Introducción: El dengue es la enfermedad viral transmitida por mosquitos de más rápida propagación en el mundo. A pesar de la alta incidencia de la enfermedad no existe tratamiento antiviral efectivo ni vacuna aprobada para su uso contra esta infección. La planta Ageratina havanensis ha sido ampliamente utilizada por nuestra cultura popular y en otros países debido a sus diversas propiedades biológicas. Objetivo: Evaluar la actividad antiviral de cuatro extractos provenientes de Ageratina havanensis y dos flavonoides aislados de dicha planta frente al virus dengue 2. Métodos: La pesquisa primaria de actividad antiviral de cada extracto y flavonoide se realizó mediante el ensayo de detección de la productividad vírica, y se evaluó la acción virucida de los extractos etanólico de tallo y butanólico de hoja. Resultados: Todos los extractos inhibieron la replicación viral al evidenciarse disminución del número de placas de lisis, sin embargo, no se evidenció disminución del título infectivo viral en el ensayo virucida. El tratamiento con la sakuranetina mostró valores de inhibición de la productividad viral entre 61-91 por ciento, y para la 7-metoxiaromadendrina se registraron valores de reducción viral entre 64-86 por ciento. Conclusiones: Los extractos y flavonoides aislados de Ageratina havanensis mostraron acción antiviral. Los extractos etanólico de tallo y butanólico de hojas no poseen acción virucida sobre la cepa viral empleada. El presente trabajo constituye el primer informe respecto a la evaluación de extractos y compuestos aislados de A. havanensis frente al virus dengue(AU)

Introduction: Dengue is the fastest spreading mosquito-borne viral disease worldwide. Despite its high incidence, no effective antiviral treatment or vaccine has been approved for use against this infection. The plant Ageratina havanensis has been widely used in our folk culture and in other countries due to its various biological properties. Objective: Evaluate the antiviral activity of four extracts from Ageratina havanensis and two flavonoids isolated from that plant against the dengue 2 virus. Methods: Primary screening of the antiviral activity of each extract and flavonoid was conducted by viral productivity detection assay, and an evaluation was carried out of the virucidal action of the stem ethanolic extract and the leaf butanolic extract. Results: All the extracts inhibited viral replication by a reduction in the number of lysis plates. However, no evidence was found of a reduced viral infective titer in the virucidal assay. Treatment with sakuranetin achieved viral productivity inhibition values of 61 percent-91 percent, whereas 7-methoxyaromadendrin obtained viral reduction values of 64 percent-86 percent Conclusions: The extracts and flavonoids isolated from Ageratina havanensis displayed antiviral activity. The stem ethanolic extract and the leaf butanolic extract do not have a virucidal action against the viral strain used. The paper is the first report about the effect of extracts and compounds isolated from A. havanensis against the dengue virus(AU)

Evaluación preliminar de la actividad antiviral del extracto de Laurencia obtusa frente a herpesvirus y virus dengue / Preliminary evaluation of the antiviral activity of Laurencia obtuse extract against herpesvirus and dengue virus

Introducción: los virus del herpes simplex y el virus dengue se encuentran entre los patógenos humanos de mayor importancia dados los altos niveles de morbilidad y mortalidad que provocan. El fallo en el desarrollo de vacunas para ambos virus, así como la ausencia de fármacos para el tratamiento del dengue y el surgimiento de nuevas variantes virales resistentes a las drogas existentes para los herpesvirus, incrementa la necesidad de buscar nuevas fuentes de compuestos con actividad antiviral. En este sentido las algas son una alternativa interesante debido a la diversidad de compuestos con actividad biológica que se han aislado de estos organismos. Objetivo: evaluar la actividad antiviral in vitro de un extracto hidroalcohólico del alga roja Laurencia obtusa frente a virus herpes simplex tipo1, herpes simplex tipo 2 y virus dengue. Métodos: se determinó el valor de concentración citotóxica media empleando el ensayo de reducción de MTT en células Vero y C6/36HT. El cálculo de la concentración efectiva media se realizó mediante inhibición del efecto citopático en células Vero o C6/36HT, dependiendo del virus. El índice selectivo se calculó a partir de la relación IS=CC50/CE50. Resultados: el extracto hidroalcohólico de L obtusa no es tóxico en las células Vero y C6/36HT, en el rango de concentraciones evaluadas. El extracto inhibió la replicación in vitro de los virus HHV 1 y HHV 2 en células Vero con valores de IS>29 y 42, respectivamente. Por otra parte no se observó inhibición de la replicación de DENV-2 en células C6/36HT. Conclusiones: el extracto hidroalcohólico de L. obtusa posee actividad antiviral frente a HHV 1 y HHV 2 pudiera ser empleado en el desarrollo de fármacos antiherpéticos novedosos. Este trabajo constituye el primer informe sobre la actividad antiviral de esta especie de alga(AU)

Introduction: herpes simplex and dengue viruses are the most important human pathogens with high levels of morbidity and mortality. Lack of vaccine development for these viruses, non-existence of drugs for dengue treatment and the emergence of new herpes virus variants resistant to drugs currently in use reinforce the need for new sources of antiviral drugs. Algae remain an interesting alternative in this regard, due to the diversity of compounds with biological activity found in these organisms. Objective: to evaluate the in vitro antiviral activity of a hydroalcoholic extract of the red seaweed Laurencia obtusa against herpes simplex type 1, herpes simplex type 2 and dengue virus. Methods: the mean cytotoxic concentration was determined by using the MTT reduction assay in Vero and C6/36HT cells. Mean effective concentration was estimated with the cytopathic effect inhibition in Vero or C6/36HT cells depending on the virus. Selective index (SI) =CC50/EC50 was calculated. Results: hydroalcoholic extract from L.obtusa was not toxic at the evaluated concentrations The extract managed to inhibit HHV 1 y HHV 2 virus replication in Vero cells with SI values higher than 29 and 42, respectively. On the other hand there was no inhibition of DENV-2 replication in C6/36HT cells.Conclusions: hydroalcoholic extract from L. obtusa showed in vitro antiviral activity against HHV 1 and HHV 2 and could be employed as a source for new antiviral compounds. This is the first report on the antiviral activity of this alga species(AU)

Evaluación preliminar de la actividad antiviral del extracto de Laurencia obtusa frente a herpesvirus y virus dengue / Preliminary evaluation of the antiviral activity of Laurencia obtuse extract against herpesvirus and dengue virus

Introducción: los virus del herpes simplex y el virus dengue se encuentran entre los patógenos humanos de mayor importancia dados los altos niveles de morbilidad y mortalidad que provocan. El fallo en el desarrollo de vacunas para ambos virus, así como la ausencia de fármacos para el tratamiento del dengue y el surgimiento de nuevas variantes virales resistentes a las drogas existentes para los herpesvirus, incrementa la necesidad de buscar nuevas fuentes de compuestos con actividad antiviral. En este sentido las algas son una alternativa interesante debido a la diversidad de compuestos con actividad biológica que se han aislado de estos organismos. Objetivo: evaluar la actividad antiviral in vitro de un extracto hidroalcohólico del alga roja Laurencia obtusa frente a virus herpes simplex tipo1, herpes simplex tipo 2 y virus dengue. Métodos: se determinó el valor de concentración citotóxica media empleando el ensayo de reducción de MTT en células Vero y C6/36HT. El cálculo de la concentración efectiva media se realizó mediante inhibición del efecto citopático en células Vero o C6/36HT, dependiendo del virus. El índice selectivo se calculó a partir de la relación IS=CC50/CE50. Resultados: el extracto hidroalcohólico de L obtusa no es tóxico en las células Vero y C6/36HT, en el rango de concentraciones evaluadas. El extracto inhibió la replicación in vitro de los virus HHV 1 y HHV 2 en células Vero con valores de IS>29 y 42, respectivamente. Por otra parte no se observó inhibición de la replicación de DENV-2 en células C6/36HT. Conclusiones: el extracto hidroalcohólico de L. obtusa posee actividad antiviral frente a HHV 1 y HHV 2 pudiera ser empleado en el desarrollo de fármacos antiherpéticos novedosos. Este trabajo constituye el primer informe sobre la actividad antiviral de esta especie de alga(AU)

Introduction: herpes simplex and dengue viruses are the most important human pathogens with high levels of morbidity and mortality. Lack of vaccine development for these viruses, non-existence of drugs for dengue treatment and the emergence of new herpes virus variants resistant to drugs currently in use reinforce the need for new sources of antiviral drugs. Algae remain an interesting alternative in this regard, due to the diversity of compounds with biological activity found in these organisms. Objective: to evaluate the in vitro antiviral activity of a hydroalcoholic extract of the red seaweed Laurencia obtusa against herpes simplex type 1, herpes simplex type 2 and dengue virus. Methods: the mean cytotoxic concentration was determined by using the MTT reduction assay in Vero and C6/36HT cells. Mean effective concentration was estimated with the cytopathic effect inhibition in Vero or C6/36HT cells depending on the virus. Selective index (SI) =CC50/EC50 was calculated. Results: hydroalcoholic extract from L.obtusa was not toxic at the evaluated concentrations The extract managed to inhibit HHV 1 y HHV 2 virus replication in Vero cells with SI values higher than 29 and 42, respectively. On the other hand there was no inhibition of DENV-2 replication in C6/36HT cells. Conclusions: hydroalcoholic extract from L. obtusa showed in vitro antiviral activity against HHV 1 and HHV 2 and could be employed as a source for new antiviral compounds. This is the first report on the antiviral activity of this alga species(AU)

Actividad antiviral de un extracto acuoso del alga roja Laurencia obtusa frente a virus influenza A y B / Antiviral activity of an aqueous extract from the red alga Laurencia obtusa against influenza A and B viruses

(au)INTRODUCCIÓN: la terapia antiviral frente a las infecciones provocadas por virus influenza se basa en empleo de inhibidores de las proteínas M2 y neuraminidasa (NA). Sin embargo, la emergencia de cepas estacionales resistentes a ambos grupos de fármacos motiva la búsqueda de nuevos fármacos anti-influenza. Los extractos de algas pueden ser utilizados como fuente para la obtención de estos compuestos, teniendo en cuenta la diversidad de metabolitos descrita en estos organismos. OBJETIVO: evaluar la actividad antiviral in vitro de un extracto acuoso del alga roja Laurencia obtusa frente a virus influenza A (H1N1), A (H3N2) e influenza B. MÉTODOS: se evaluó la citotoxicidad en células MDCK, mediante cálculo de la viabilidad celular, en presencia de concentraciones crecientes del extracto. Los efectos sobre la replicación viral se cuantificaron mediante determinación de los niveles de la hemaglutinina (HA) y de la inhibición del efecto citopático (ECP). El índice selectivo (IS) se calculó a partir de la relación IS=CC50/CE 50. RESULTADOS: el extracto acuoso de Laurencia obtusa posee actividad antiviral in vitro frente a virus influenza B, A (H3N2) y A (H1N1) con valores de IS de 7,73; 11,79 y 12,95; respectivamente. CONCLUSIONES: Laurencia obtusa inhibe la replicación de virus influenza de elevada importancia clínica. La realización de ensayos secundarios de caracterización de la actividad biológica, así como de caracterización molecular del extracto, podrían permitir el desarrollo de novedosos compuestos antivirales. Este trabajo constituye el primer informe de actividad inhibitoria de esta especie de macroalga frente a virus influenza.compuestos antivirales. Este trabajo constituye el primer informe de actividad inhibitoria de esta especie de macroalga frente a virus influenza(AU)

INTRODUCTION: antiviral therapy against infections caused by influenza viruses is based on the use of inhibitors of M2 protein and neuraminidase (NA). However, the emergence of seasonal strains resistant to both drug groups has led to the search for new anti-influenza medications. Extracts from algae may be used as a source of compounds, considering the diversity of metabolites described for these organisms. OBJECTIVE: evaluate the in vitro antiviral activity of an aqueous extract from the red alga Laurencia obtusa against influenza A (H1N1), A (H3N2) and B viruses. METHODS: cytotoxicity was evaluated in MDCK cells by cell viability estimation in the presence of growing concentrations of the extract. The effects over viral replication were quantified by determining hemagglutinin (HA) levels and inhibition of the cytopathic effect (CPE). The selective index (SI) was estimated by SI=CC50/CE50. RESULTS: the aqueous extract of Laurencia obtusa showed in vitro antiviral activity against influenza B, A (H3N2) and A (H1N1) viruses with SI values of 7.73, 11.79 and 12.95, respectively. CONCLUSIONS: Laurencia obtusa inhibits the replication of influenza viruses, a fact of great clinical importance. Secondary assays to characterize the biological activity and molecular composition of the extract may lead to the development of novel antiviral compounds. The present paper is the first report on the inhibitory activity of this macroalga species against influenza viruses(AU)

Actividad antiviral in vitro de un extracto acuoso del alga roja Tricleocarpa fragilis frente a virus influenza A / In vitro antiviral activity of aqueous extract from red seaweed Tricleocarpa fragilis to Influenza A virus

Introducción: los virus influenza constituyen importantes patógenos de humanos que anualmente causan alrededor de 500 000 muertes a nivel mundial. La emergencia de variantes virales resistentes a los fármacos antiinfluenza disponibles, motiva la búsqueda de nuevos antivirales. Los extractos obtenidos a partir de algas pueden ser empleados con esta finalidad, teniendo en cuenta la diversidad de metabolitos secundarios descritos en estos organismos. Objetivo: evaluar la actividad antiviral in vitro de un extracto acuoso del alga roja Tricleocarpa fragilis frente a virus influenza A(H1N1) y A(H3N2). Métodos: se determinó el valor de concentración citotóxica media (CC50) empleando el ensayo de reducción de MTT en células MDCK. El cálculo de la concentración inhibitoria media (CI50) se realizó mediante un ensayo de hemaglutinación y de inhibición del efecto citopático (ECP) en células MDCK. El índice selectivo (IS) se calculó a partir de la relación IS= CC 50/CI50. Resultados: el extracto acuoso de T. fragilis no resultó tóxico en las células MDCK, en el rango de concentraciones evaluadas. El alga inhibió la replicación in vitro de virus influenza A(H1N1), A(H3N2) con valores de IS> 11,4 y 106, respectivamente. Conclusiones: el extracto acuoso de T. fragilis posee actividad antiviral frente a virus influenza A y puede ser empleado en el desarrollo de fármacos antiinfluenza novedosos. Este trabajo constituye el primer informe sobre la actividad antiviral de esta especie de alga(AU)

Introduction: influenza viruses are major human pathogens that cause over 500 000 deaths every year. The emergence of viral variants resistant to approved antiviral drugs has prompted the search for new anti-influenza compounds. Alga could be used as a source for the development of new anti-influenza drugs, taking into account the diversity of secondary metabolites previously described in these organisms. Objective: to evaluate the in vitro antiviral activity of aqueous extract of the red seaweed Tricleocarpa fragilis against influenza A virus. Methods: the mean citotoxicity (CC50) concentration of the extract was determined by using the MTT reduction assay in MDCK cells. The mean inhibitory concentration (CI50) was estimated by means of viral protein (hemagglutinin) test and a cytopathic effect inhibition test in MDCK cells. The Selective index was calculated from (SI)= CC50/IC50. Results: T. fragilis was not toxic at the concentrations evaluated in MDCK cells. The aqueous extract inhibited in vitro influenza A(H1N1) and A(H3N2) virus replication with SI values > 11.4 and 106; respectively. Conclusions: aqueous extract of T. fragilis showed in vitro anti-influenza activity and can be employed as a source for new antiviral drugs. This paper was the first report for the antiviral activity of T fragilis(AU)

Actividad antiviral in vitro de un extracto acuoso del alga roja Tricleocarpa fragilis frente a virus influenza A / In vitro antiviral activity of aqueous extract from red seaweed Tricleocarpa fragilis to Influenza A virus

INTRODUCCIÓN: los virus influenza constituyen importantes patógenos de humanos que anualmente causan alrededor de 500 000 muertes a nivel mundial. La emergencia de variantes virales resistentes a los fármacos antiinfluenza disponibles, motiva la búsqueda de nuevos antivirales. Los extractos obtenidos a partir de algas pueden ser empleados con esta finalidad, teniendo en cuenta la diversidad de metabolitos secundarios descritos en estos organismos. OBJETIVO: evaluar la actividad antiviral in vitro de un extracto acuoso del alga roja Tricleocarpa fragilis frente a virus influenza A(H1N1) y A(H3N2) MÉTODOS: se determinó el valor de concentración citotóxica media (CC50) empleando el ensayo de reducción de MTT en células MDCK . El cálculo de la concentración inhibitoria media (CI50) se realizó mediante un ensayo de hemaglutinación y de inhibición del efecto citopático (ECP) en células MDCK. El índice selectivo (IS) se calculó a partir de la relación IS= CC 50/CI50. RESULTADOS: el extracto acuoso de T. fragilis no resultó tóxico en las células MDCK, en el rango de concentraciones evaluadas. El alga inhibió la replicación in vitro de virus influenza A(H1N1), A(H3N2) con valores de IS> 11,4 y 106, respectivamente. CONCLUSIONES: el extracto acuoso de T. fragilis posee actividad antiviral frente a virus influenza A y puede ser empleado en el desarrollo de fármacos antiinfluenza novedosos. Este trabajo constituye el primer informe sobre la actividad antiviral de esta especie de alga(AU)

INTRODUCTION: influenza viruses are major human pathogens that cause over 500 000 deaths every year. The emergence of viral variants resistant to approved antiviral drugs has prompted the search for new anti-influenza compounds. Alga could be used as a source for the development of new anti-influenza drugs, taking into account the diversity of secondary metabolites previously described in these organisms. OBJECTIVE: to evaluate the in vitro antiviral activity of aqueous extract of the red seaweed Tricleocarpa fragilisagainst influenza A virus. METHODS: the mean citotoxicity (CC50) concentration of the extract was determined by using the MTT reduction assay in MDCK cells. The mean inhibitory concentration (CI50) was estimated by means of viral protein (hemagglutinin) test and a cytopathic effect inhibition test in MDCK cells. The Selective index was calculated from (SI)= CC50/IC50. RESULTS: T. fragilis was not toxic at the concentrations evaluated in MDCK cells. The aqueous extract inhibited in vitro influenza A(H1N1) and A(H3N2) virus replication with SI values > 11.4 and 106; respectively. CONCLUSIONS: aqueous extract of T. fragilis showed in vitro anti-influenza activity and can be employed as a source for new antiviral drugs. This paper was the first report for the antiviral activity of T. fragilis(AU)

Evaluación preliminar de la actividad antiviral del extracto acuoso de Phyllanthus orbicularis frente al virus VHS-1

Se evaluó la actividad antiviral del extracto acuoso de Phyllanthus orbicularis; un miembro de la familia Euohorbiacea, frente al virus del herpes simple tipo 1 (VHS-1), tanto en cultivo celular, específicamente en fibroblastos de prepucio humano, como un modelo animal en ratones Balb-c. El efecto extracelular del extracto sobre VHS-1, resultó ser efectivo, obteniéndose un índice selectivo de 44, lo que apunta hacia una posible acción virucida sobre la partícula. En el ensayo in vivo, la administración del extracto acuoso (12 mg/kg), de manera tópica, redujo de forma significativa el desarrollo de lesiones en ratones infectados por vía subcutánea con VHS-1 (1 x 106 UFP). Estos resultados sugieren la consideración de Phyllanthus orbicularis, como un posible candidato anti VHS-1.

The antiviral activity of the aqueous extract of Phyllanthus orbicularis, a member of the Euohorbiacea family, against the simple herpes virus type1 was evaluated in cellular culture, specifically in fibroblasts of human prepucium, and in an animal model, Balb-c mice. The extracelullar effect of the extract on HIV-1 proved to be effective. A selective index of 44 was obtained, which shows a possible virucidal action on the particle. In the trial in vivo, the topical administration of the aqueous extract (12 mg/kg) reduced significantly the development of lesions in mice subcutaneously infected with HIV-1 (1 x 106 UFP). These results suggest the consideration of Phyllanthus orbicularis as a possible anti-HIV-1 candidate.

[Preliminary evaluation of the antiviral activity of the aqueous extract of Phyllanthus orbicularis vs HIV-1 infection]. / Evaluación preliminar de la actividad antiviral del extracto acuoso de Phyllanthus orbicularis frente al virus VHS-1.

The antiviral activity of the aqueous extract of Phyllanthus orbicularis, a member of the Euohorbiacea family, against the simple herpes virus typel was evaluated in cellular culture, specifically in fibroblasts of human prepucium, and in an animal model, Balb-c mice. The extracelullar effect of the extract on HIV-1 proved to be effective. A selective index of 44 was obtained, which shows a possible virucidal action on the particle. In the trial in vivo, the topical administration of the aqueous extract (12 mg/kg) reduced significantly the development of lesions in mice subcutaneously infected with HIV-1 (1 x 106 UFP). These results suggest the consideration of Phyllanthus orbicularis as a possible anti-HIV-1 candidate

Inactivación del AgsHB por un extracto de Phyllanthus orbicularis / Inactivation of AgsHB by an extract from Phyllanthus orbicularis

Algunas especies del género Phyllanthus han demostrado actividad frente al virus de la hepatitis B in vitro e in vivo. En este trabajo se evalúa la capacidad de inactivación sobre el AgsHB de un extracto acuoso de la especie endémica Phyllanthus orbicularis. Se analizaron 4 concentraciones del extracto (100, 50, 25, 12,5 mg/mL) frente a 34 sueros positivos a este marcador. Todas las concentraciones ensayadas mostraron la capacidad de disminuir el valor de densidad óptica en más del 60 porciento de los sueros tratados, mientras que el por ciento de sueros que se convirtieron a negativos fue de 88,2 porciento, 97,1 porciento, 50 porciento y 8,8 porciento, respectivamente. La concentración de 12,5 mg/mL no mostró diferencias estadísticas con respecto al grupo control; mientras que las concentraciones de 100 mg/mL y 50 mg/mL, las cuales no se diferencian estadísticamente entre sí, fueron las más efectivas. Estos resultados muestran que el extracto acuoso de P. orbicularis presenta uno o varios compuestos capaces de inactivar in vitro al AgsHB

Inactivación del AgsHB por un extracto de Phyllanthus orbicularis / Inactivation of AgsHB by an extract from Phyllanthus orbicularis

Algunas especies del género Phyllanthus han demostrado actividad frente al virus de la hepatitis B in vitro e in vivo. En este trabajo se evalúa la capacidad de inactivación sobre el AgsHB de un extracto acuoso de la especie endémica Phyllanthus orbicularis. Se analizaron 4 concentraciones del extracto (100, 50, 25, 12,5 mg/mL) frente a 34 sueros positivos a este marcador. Todas las concentraciones ensayadas mostraron la capacidad de disminuir el valor de densidad óptica en más del 60 porciento de los sueros tratados, mientras que el por ciento de sueros que se convirtieron a negativos fue de 88,2 porciento, 97,1 porciento, 50 porciento y 8,8 porciento, respectivamente. La concentración de 12,5 mg/mL no mostró diferencias estadísticas con respecto al grupo control; mientras que las concentraciones de 100 mg/mL y 50 mg/mL, las cuales no se diferencian estadísticamente entre sí, fueron las más efectivas. Estos resultados muestran que el extracto acuoso de P. orbicularis presenta uno o varios compuestos capaces de inactivar in vitro al AgsHB (AU)

Inactivación in vitro del Ags HB por extractos de plantas del género Phyllanthus

Se estudiaron 3 especies del género Phyllanthus procedentes de la zona oriental de Cuba con el fin de determinar la capacidad inactivante del antígeno de superficie (Ags HB) del virus hepatitis B in vitro . Para ello se prepararon extractos alcohólicos de cada especie y de diferentes partes de dichas plantas, con las cuales se trataron sueros de pacientes positivos al Ags HB. Los resultados demuestran que las especies estudiadas poseen la propiedad de inactivar dicho antígeno entre el 93 y el 97 % de los sueros ensayados. El análisis de la capacidad de inactivación de las 3 partes del Phyllanthus chamaecristoides reveló una mayor actividad en los extractos de tallos (97 %), con un comportamiento similar en las 2 temperaturas de incubación utilizadas. Se observa presencia de flavonoides en el extracto de esta especie.